I mange tilfælde er læger nødt til korrekt at vurdere, hvor godt og harmonisk de beskyttende funktioner i patientens krop fungerer. Til en nøjagtig diagnose af forskellige sygdomme, blodpatologier, påvisning af immundefekter anvendes en særlig blodprøve af ELISA. Denne forkortelse står for enzymimmunoanalyse.

  • Essensen af ​​ELISA-metoden
  • Sådan forberedes analysen?
  • Indikationer
  • Analyse fordele
  • PCR-metode
  • Sådan forberedes analysen?
  • Diagnostik af viral hepatitis ved ELISA og PCR

Essensen af ​​ELISA-metoden

Denne metode er en af ​​de immunkemiske reaktioner, der er baseret på interaktionen mellem antigener og antistoffer. Et antigen-enzymmolekyle er kemisk bundet til antistofmolekylet. Enzymet anvendes som et mærke, hvormed en af ​​reaktionskomponenterne overvåges.

De vigtigste komponenter i ELISA er:

  • antigen;
  • antistof;
  • et antistof mærket med et enzym;
  • enzymsubstrat;
  • indikatorfarve.

Antistoffer eller immunglobuliner produceres i det øjeblik, hvor nogle antigener eller fremmede mikroorganismer kommer ind i kroppen. Immunoglobuliner kommer i kontakt med antigener og gør dem uskadelige. Ved binding til et specifikt antigen danner immunoglobuliner en slags kompleks: antigen-antistof. Dette sæt kan have både kvantitative og kvalitative indikatorer. Det er dem, der bestemmes med høj nøjagtighed ved hjælp af ELISA-metoden..

I nogle tilfælde tages cerebrospinalvæske eller indholdet af glaslegemet som testmateriale. Hos gravide undersøges fostervand. Men oftest bruges patientens blod til forskning. Det er taget fra en vene strengt på tom mave..

Sådan forberedes analysen?

Før du tager testen, skal du afstå fra at spise i 12 timer. I 2-3 dage før analysen behøver du heller ikke at spise fede og stegte fødevarer, drikke alkohol.

Fysisk aktivitet før test og stress påvirker muligvis ikke resultatet på den bedste måde, så det tilrådes at udelukke dem.

Lægen skal vide, om patienten har taget medicin dagen før. Kvinder er nødt til at informere deres læge om fasen i deres menstruationscyklus - dette betyder også noget.

Indikationer

Lægen kan ordinere levering af denne test, hvis der er mistanke om følgende sygdomme:

  • virussygdomme - hepatitis, herpes, cytomegalovirus osv.
  • allergiske tilstande
  • seksuelt overførte sygdomme - chlamydia, syfilis, mycoplasmose osv.;
  • immundefekt sygdomme;
  • nogle kræftformer (såsom leverkræft).

ELISA-metoden anvendes også, så den behandlende læge kan vurdere, hvor effektiv den behandling, der er ordineret til patienten, er til behandling af en bestemt sygdom, hvad er niveauet af hormoner i patienten. Det er også inkluderet i den omfattende undersøgelse af patienten inden den kommende operation..

Fortolkning af nogle indikationer af ELISA-analysen:

IgG-indikator,IgA-indikatorIgM-indikatorResultat
ikke defineretikke defineret-fuld bedring
---ingen immunitet

til infektion

+ og -+ og -+akut infektion
+--Postvaccination eller

postinfektiøs immunitet

+ og -+ og --kronisk infektion
+++forværring af kronisk

infektioner

Ventetiden for resultater afhænger af, hvilken type sygdom der skal diagnosticeres. Derudover er det nødvendigt at tage højde for kapaciteterne i laboratoriet, hvor forskningen udføres. For at spare penge venter nogle små medicinske institutioner på, at flere patienter donerer blod for at bruge reagenser på samme tid.

Men selv med alle muligheder taget i betragtning, skal du få resultater senest 10 dage efter din blodtrækning. Og i det hurtigste tilfælde er ventetiden 1 dag.

Analyse fordele

De utvivlsomme fordele ved denne blodprøvemetode inkluderer:

  • høj nøjagtighed af indikatorer. ELISA er 10-100 gange mere følsom end andre metoder;
  • høj implementeringshastighed - gevinsten i tid til at opnå resultatet øges med 30 gange;
  • lave omkostninger sammenlignet med andre forskningsmetoder
  • muligheden for tidlig diagnose af sygdomme og sporing af sygdomsprocessens dynamik
  • automatisering af alle forskningsfaser;
  • høj forening.

Ulemperne inkluderer det faktum, at resultaterne i nogle tilfælde både er falsk positive og falske negative. Nøjagtigheden kan påvirkes af patientens indtagelse af et antal lægemidler, forskellige metaboliske lidelser hos patienten og tilstedeværelsen af ​​visse kroniske sygdomme (for eksempel reumatoid arthritis), hvor kroppen aktivt producerer antistoffer.

Når denne test tages fra et nyfødt barn, kan pålideligheden også blive forringet på grund af tilstedeværelsen af ​​moderantistoffer i babyens blod..

PCR-metode

For at dobbelttjekke ELISA-dataene for at afklare diagnosen tilbydes patienten at sende en PCR-analyse. Dette er diagnosen af ​​polymerasekædereaktioner. Takket være denne analyse påvises et mikroskopisk fragment af DNA af ethvert sygdomsfremkaldende middel, for eksempel hepatitisvirus. Analysens pålidelighed er i de fleste tilfælde 100%.

ELISA-analysen er ikke i stand til at opdage et antal kroniske sygdomme med et trægt forløb, og PCR-metoden er ganske i stand til at gøre dette. Ved hjælp af denne analyse opdages sygdomme som mononukleose, viral hepatitis, cytomegalovirus, krydsbåren encephalitis, forskellige seksuelt overførte infektioner, papillomavirus, candidiasis, HIV.

Materialet til forskning er blod såvel som urin, spyt, slim, sæd, skrabning af epitelet, intraartikulære væsker.

Sådan forberedes analysen?

For at resultatet skal være korrekt, skal patienten forberede sig korrekt til testen. Hvis der tages venøst ​​blod til analyse, som et par timer før levering ikke kan spises eller drikkes. Et par dage før analysen anbefales det at udelukke alle fede og stegte fødevarer og fødevarer, der kan forårsage en allergisk reaktion, fra din diæt. Undgå at drikke alkoholholdige drikkevarer og ryge.

Mindst 10 dage før diagnosedagen skal du også stoppe med at tage antibakterielle lægemidler. Hvis urin sendes til analyse, er det umuligt at urinere inden opsamling i ca. 3 timer før opsamling. Urin opsamles om morgenen i en strengt steril krukke.

Inden kvinder tager et udstryg, bør kvinder ikke vaske og bruge vaginale suppositorier.

Det er nødvendigt at tage et udstrygning til analyse inden menstruationens begyndelse eller 4 dage efter deres afslutning. Patienten modtager svaret en dag efter testen.

Diagnostik af viral hepatitis ved ELISA og PCR

For at bekræfte diagnosen "viral hepatitis" hos en patient spiller resultaterne af undersøgelser med ELISA og PCR en førende rolle. Via PCR detekteres virusets genetiske materiale i patientens blod, hvilket gør det muligt ikke kun at bekræfte diagnosen, men også at identificere virusmængden og at bestemme selve den infektiøse proces. Ved hjælp af ELISA-diagnostik opdages antistoffer mod hepatitisvira.

Lægen stiller oprindeligt diagnosen hepatitis A efter at have interviewet patienten ifølge klager, der indikerer en akut sygdomsudbrud: svær kvalme og opkastning, mavesmerter og udvikling af gulsot. I afføringen af ​​en patient, hvis de opsamles i det akutte stadium af sygdommen, kan en virus detekteres.

Når man undersøger patientens blod for ELISA i den akutte fase af sygdommen, øges niveauet af IgM signifikant, og IgG-titeren forbliver på et højt niveau, selv efter at patienten kommer sig. Specifikke antistoffer påvises så tidligt som dag 3 i den akutte fase af sygdommen og kan vare i op til seks måneder. Alle moderne testsystemer til diagnosticering af hepatitis A er baseret på ELISA-metoden.

For at diagnosticere viral hepatitis B forsøger læger at bruge både ELISA-metoden og PCR-metoden. Et højt niveau af IgM- og IgG-titere indikerer en høj aktivitet af virussen, hvilket er karakteristisk for en nylig infektion. I dette tilfælde henvender de sig til PCR-diagnostik for at identificere graden af ​​virusets koncentration.

Begge metoder anvendes også, hvis der er mistanke om hepatitis C. IgM-titer-antistoffer vil blive påvist ca. 8 uger efter infektion, og IgG-titer vises efter 12 uger. Ved hjælp af PCR-diagnostik bestemmer lægen nøjagtigt scenen for den infektiøse proces, mængden og kvaliteten af ​​selve virussen. Du kan også bestemme genotypen på hepatitis C-virus.

Faktum er, at videnskaben i øjeblikket kender 11 typer af denne virus. I Rusland er 3 genotyper mest almindelige. Hvis lægen ved nøjagtigt, hvilken genotype patienten er inficeret med, vil behandlingen specifikt være rettet mod bekæmpelse af en bestemt genotype. Alle lægemidler og doser vælges korrekt, og chancerne for succes øges således markant.

På trods af at ELISA-metoden blev opfundet for længe siden (for første gang en sådan analyse blev udført i 1971), har dens relevans ikke mistet sin betydning i dag..

Det skal huskes, at kun en læge kan fastslå behovet for en sådan diagnose. Og kun en kvalificeret læge kan fortolke resultaterne af analysen korrekt og ordinere den passende behandling. I intet tilfælde gør selvdiagnostik og endnu mere selvmedicinering.

ELISA til viral hepatitis

Flere laboratorie- og instrumentteknikker bruges til at diagnosticere viral hepatitis inden for den medicinske protokol. En af de mest pålidelige er det enzymbundne immunosorbentassay (ELISA). Metoden hjælper med at bestemme tilstedeværelsen af ​​antigen til en bestemt type virus. Til dette udføres en standardprocedure ved at tage blod fra patientens vene. Resultaterne bliver kendt inden for en uge efter analysen.

Hvad er ELISA?

Udtrykket står for "enzymimmunoanalyse". Det involverer bestemmelse af antigen-antistofkomplekser i blodet for at afklare patiologiens etiologi. Hvis det er en virus, bestemmes dens typer og underarter. Antigener er partikler på overfladen af ​​patogenceller, der binder til specifikke områder af antistoffer. Sidstnævnte er immunmolekyler produceret af kroppen til eget forsvar. Antigener og antistoffer er unikke, og bestemmelsen af ​​deres struktur ved hjælp af enzymimmunanalyse indikerer tilstedeværelsen af ​​en specifik patologi i patientens krop. Enzymer bruges som etiketter, som gav metoden navnet..

Forskning fordele

ELISA er en meget nøjagtig teknik, dens følsomhed når 90%. Hun hjælper med at screene for parenteral hepatitis. Disse sygdomme overføres ved injektion eller blodtransfusion. ELISA hjælper med at identificere patienter, der er asymptomatiske. Dette er størstedelen af ​​kroniske patienter. De risikerer at udvikle skrumpelever. Dets påvisning i de senere stadier er en dårlig prognose. Derfor tillader det enzymbundne immunosorbentassay rettidig identifikation af sygdommen og sparer penge på behandlingen. ELISA verificerer patiologiens etiologi og bestemmer sygdommens prognose. Diagnostiske sæt til det er billige og har lang holdbarhed. For hastighed, bekvemmelighed og nøjagtighed af data kaldes ELISA den ekspressmetode..

Når der er behov for analyse?

ELISA er nødvendigt, når det er nødvendigt at afklare etiologien af ​​det virale patogen for at bestemme behandlingsregimen. Patienten diagnosticeres med kronisk hepatitis B og C. eller en tidligere sygdom med subtype A. Virus. Teknikken skal anvendes på familiemedlemmer til patienten, der kan blive smittet. På et hospital med infektionssygdomme udføres en analyse af alle patienter, der har følgende symptomer:

  • Gulsot. Gulhed af huden ledsages ikke af smerter i det rigtige hypokondrium og misfarvning af afføring og urin.
  • Øget kropstemperatur. Det vokser til subfebrile tal, nogle gange opstår feber.
  • Dyspepsi. Kvalme og opkastning er til stede og giver ikke lindring.
  • Umotiveret svaghed.
  • Småpunktsudbrud på kroppen. Disse er mindre blødninger på grund af leversvigt..
  • Tyngde i det rigtige hypokondrium. Symptomet skyldes, at den forstørrede lever strækker sin egen kapsel, som indeholder mange nerveender.

Den vigtigste indikation for analysen er tilstedeværelsen af ​​visse anamnestiske data. Hvis patienten tidligere led af injektionsmisbrug, fik han blodtransfusioner eller organtransplantationer, dette er en grund til at udføre ELISA.

Forberedelse til dirigering

For at ELISA-resultater skal være pålidelige, skal du først forberede dig. Dagen før donation af blod rådes patienten til at stoppe med at spise fede og stegte fødevarer, fødevarer med en høj koncentration af farvestoffer, stabilisatorer, konserveringsmidler, smags- og aromaforstærkere. Det er uønsket at deltage i tungt fysisk arbejde og sportsøvelser umiddelbart før metoden udføres. På dagen for bloddonation skal du afstå fra morgenmaden. At tage materiale på tom mave giver dig mulighed for at få et nøjagtigt resultat. Det er nødvendigt at udelukke nogle lægemidler fra brugen. Men det anbefales ikke at gøre dette alene, da der er mulighed for sundhedsskade. Brug for en indledende konsultation med den behandlende læge.

Metodologi

ELISA-metoden består af to faser. På den første tages materialet, på det andet undersøges sidstnævnte i laboratoriet. Den indledende fase er standard. Forud for det er forberedelsen af ​​patienten til bloddonation. I et sterilt rum tages biomaterialer, sendes i forseglede beholdere til laboratorieforskning. Yderligere bestemmelse af antigen-antistofkomplekser finder sted ved hjælp af enzymer og testsystemer på specialudstyr. Resultatet bliver kendt inden for en uge og sendes til patienten via e-mail.

Afkodningsindikatorer

Datatolkning klassificeres i kvalitativ og kvantitativ. Med en kvalitativ bestemmelse betragtes testresultaterne som positive, hvis der opdages totale antistoffer mod en bestemt undertype af virussen. Påvisning af anti-HAV IgM indikerer akut og anti-HAV IgG - kronisk hepatitis A. En positiv markør HBsAg er et tegn på infektion med virussubtype B. Det observeres i de akutte og kroniske faser af sygdommen. Hvis der påvises HBCAg, har personen kronisk hepatitis C. Og anti-HDV signalerer en infektion med underarter D. Patienter, der har en positiv markør for virussen, skal undersøges yderligere for mere nøjagtigt at verificere diagnosen..

ELISA-test for hepatitis C: hvad er det, indikationer, afkodning

Omkring 170 millioner mennesker over hele verden er inficeret med hepatitis C-virus. Sygdommen er snigende - med slørede symptomer på sygdommens debut går dens debut ubemærket hen. Kroniske former udvikler sig ofte, der fører til ødelæggelse af leverceller.

Resultatet af hepatitis C er skrumpelever eller leverkræft. For at identificere sygdomsmarkører ordineres først og fremmest et enzymimmunassay - ELISA til hepatitis C.

Hvad finder jeg ud af? Indholdet af artiklen.

Hvad er ELISA?

Analysen er baseret på evnen hos specifikke antistoffer (blodproteiner) til at binde til et antigen (viruspartikler), mens et af dem er "mærket" med et enzym. Det resulterende kompleks reagerer med det farvede substrat, som registreres ved spektrofotometriske metoder.

Et enzymbundet immunosorbent assay (ELISA) for hepatitis C viser ikke tilstedeværelsen af ​​selve patogenet i blodet, men immunsystemets reaktion på en kollision med det. Mængden af ​​virus i blodet på tidspunktet for ELISA kan være ubetydelig ud over detektionstærsklen. Og antistoffer - immunglobuliner, som blev udviklet efter mødet med "aggressor", fortsætter med at cirkulere i kredsløbssystemet.

Det er tilstedeværelsen af ​​antistoffer, der bestemmes af ELISA. De vises i en periode fra flere dage til flere uger efter infektion med hepatitis C.

ELISA registrerer cirkulerende immunglobuliner selv ved lave koncentrationer. Efter deres type kan man bedømme sygdommens varighed. I den akutte periode, hvor hepatitisvirussen aktivt formerer sig, bestemmes klasse M immunoglobuliner.

I det kroniske stadium (6 måneder efter sygdommens indtræden) registrerer ELISA immunglobuliner klasse G. Den sidstnævnte type kan muligvis ikke indikere kronisering af processen, men selve kollisionen af ​​immunsystemet med hepatitis C-virus tidligere.

Indikationer for ELISA for hepatitis C

Screening for markører for hepatitis C, som inkluderer antistoffer - immunglobuliner, er længe blevet en rutinemæssig procedure. ELISA er ordineret til:

  • akutte og kroniske leversygdomme
  • gulsot af ukendt oprindelse
  • undersøgelse før operation
  • rutinemæssig undersøgelse af bloddonorer;
  • registrering hos fødeklinikker under graviditet. Re-analyse tages 2-4 uger før den forventede leveringsdato;
  • gennemgår hæmodialyse
  • forebyggende undersøgelser af medicinske arbejdere i kontakt med blodkomponenter og andre biologiske væsker;
  • ubeskyttet tvivlsom sex;
  • at få børn fra inficerede mødre.

Som en anbefaling ordineres en analyse af hepatitis C til patientens pårørende, der er i tæt kontakt med ham. I 50% af tilfældene kan den parenterale infektionskilde ikke identificeres. Infektionister foreslår en husstandsmetode for transmission, når inficeret blod kan komme ind i en sund persons blod gennem hudens sår og revner. Denne version har mange modstandere.

Hvordan udføres analysen?

48 timer før ELISA er alkohol, stegte, fede og salte fødevarer ekskluderet fra mad. I 12 timer, før han tager blod fra en vene, skal patienten afstå fra at tage medicin. Analysen tages om morgenen på tom mave.

Den mest anvendte "solid-fase" ELISA. Den faste fase er det materiale, hvorpå antistoffer eller antigener er fikseret. I denne egenskab anvendes membraner, der aktivt opsamler proteiner (laboratorieplader, reagensglasvægge, kugler og perler lavet af polypropylen eller polyvinylchlorid, nitrocellulose osv.).

Uanset hvilken type ELISA der er en streng indfasning af dens adfærd:

  1. I det første trin "genkendes" testmaterialet af et specifikt antistof og binder til det og danner et immunkompleks;
  2. På det andet trin reagerer det såkaldte konjugat - antistof eller antigen, mærket med et enzym, med det dannede immunkompleks;
  3. Den sidste fase af ELISA giver dig mulighed for at registrere og registrere signalet fra enzymmærket.

ELISA typer

Der er mange muligheder for at udføre analysen. De er klassificeret:

  • Efter den type reagenser, der blev brugt i første fase af ELISA:
    a) konkurrencedygtig
    b) ikke-konkurrencedygtig
  • I henhold til graden af ​​homogenitet af mediet, hvor ELISA-reaktionerne finder sted:
    a) homogen;
    b) heterogen;
  • 3) I henhold til princippet om bestemmelse af teststoffet:
    a) lige;
    b) indirekte. Det er den indirekte ELISA-metode, der bruges til at identificere markører for hepatitis C.

Direkte ELISA-metode

Denne metode bruger standardantistoffer mod hepatitis C-virus mærket med et enzym.

  1. Patientens blodserum placeres i laboratoriepladens brønde (hvis det blev valgt som den faste fase). Modstå 20 minutter, så antigener (proteiner fra hepatitis C-virus) har tid til at fæstne sig til væggene.
  2. Der tilsættes standardenzymærkede antistoffer mod hepatitis C. De opbevares i nogle få timer - i løbet af denne tid dannes antigen-antistof-mærkede immunkomplekser. Jo flere antigener i det undersøgte serum, jo ​​flere dannes sådanne komplekser.
  3. Indholdet af brøndene vaskes for at fjerne ubundne proteiner. Tilsæt derefter substratet. Dette stof skifter farve, når det reagerer med et mærkeenzym. Jo flere komplekser der dannes under ELISA, jo mere enzym kan virke på substratet og jo lysere er den kromatografiske reaktion. Den læses af en ELISA-læser og kvantificeres.

Indirekte metode

Med denne ELISA-metode binder standardantigenet til patientens serumantistoffer. Enzymærkede standardantistoffer mod immunglobuliner tilsættes til det resulterende immunkompleks.

  1. Standard hepatitis C-antigenet (viruspartikler) placeres i laboratoriepladens brønde. Antigenet er fastgjort til væggen, de løse proteiner vaskes ud af laboratorieassistenten.
  2. Testmaterialet (blodserum) placeres i brøndene tilberedt på denne måde, inkuberes. Der er obligatoriske kontrolbrønde med standardreagenser. Under inkubation dannes antigen-antistofkomplekser. Ureagerede komponenter skylles ud igen.
  3. Enzymmærket antistof mod immunoglobuliner M og G tilsættes til brøndene Disse proteiner vil kun reagere med det tidligere dannede kompleks, hvis antistoffer mod hepatitis C er til stede i testprøven..
  4. En anden komponent tilføjes - substratet. Denne kemiske forbindelse ødelægges af et enzym fra antigen-antistof-komplekset. I dette tilfælde dannes et farvet stof, hvis mængde registreres med en speciel enhed - en ELISA-læser. Jo mere enzym, jo ​​stærkere reagerer det med substratet, og jo lysere bliver farvesignalet.

Afkodning af resultaterne

ELISAs høje følsomhed spiller undertiden en grusom vittighed med patienten. Ikke alle positive resultater er en sygdom, og ikke alle negative er en garanti for frihed fra virussen..

Med en positiv ELISA bestemmes virusets genotype, og antallet af vira, der cirkulerer i blodet, bestemmes ved hjælp af PCR (polymerasekædereaktion).

Positiv

ELISA detekterer markører for den akutte fase af sygdommen (klasse M immunoglobuliner (IgM)) og klasse G immunoglobuliner (IgG). Sidstnævnte kan betyde, at patienten har kronisk hepatitis C, eller at immunsystemet har stødt på denne virus mindst en gang tidligere og udviklet immunitet.

Samtidig påvisning af to typer immunglobuliner med ELISA indikerer en forværring af kronisk hepatitis C.

Negativ

Den mest sandsynlige mulighed er, at patienten ikke er syg, og hans immunsystem aldrig har stødt på virussen..

Et pseudo-negativt resultat med ELISA kan opnås, hvis patienten blev inficeret relativt for nylig, og beskyttende antistoffer simpelthen ikke havde tid til at udvikle sig. Dette er det såkaldte "diagnostiske vindue". Dens løbetid er 6 måneder.

Endelig kan laboratoriefejl ikke udelukkes fuldstændigt..

Falsk positiv

ELISA er mindre tilbøjelige til at give fejl i sammenligning med PCR. Imidlertid er de undersøgte stoffer proteiner. Reagenset kan binde til et ikke-specifikt serumprotein. Falsk positiv ELISA for hepatitis C er ikke ualmindelig i tilfælde af:

  • vaccinationen udført dagen før
  • med autoimmune patologier eller tuberkulose, multipel sklerose, sklerodermi;
  • tumorproces
  • infektioner, der forekommer med hypertermi (influenza, akutte luftvejsinfektioner osv.).

De synder med falske positive testresultater for markører for hepatitis C hos gravide kvinder. Ganske ofte giver ELISA en falsk konklusion om tilstedeværelsen af ​​antistoffer hos patienter med blodgruppe II.

ELISA er positiv, og PCR er negativ: hvad betyder det?

Polymerasekædereaktionen detekterer tilstedeværelsen af ​​en virus i blodet og dets mængde, hjælper med at bestemme genotypen. ELISA "ser" antistoffer - celler produceret et stykke tid efter infektion og forbliver i kroppen efter ødelæggelsen af ​​"fjenden".

Der er to måder, hvorpå patienter med hepatitis C har negativ PCR og positiv EIA. Det mest sandsynlige er, at immuniteten mod virussen er dannet, og at den selv ødelægges af immunsystemet eller narkotika.

For det andet: det er umuligt at udelukke laboratoriefejl, når der udføres PCR.

Diagnosen af ​​sygdomme skal foretages af en læge. Det tager højde for alle nuancer i undersøgelsen. Og laboratoriediagnostik, herunder ELISA, er kun en hjælpemetode og ikke blottet for fejl.

Diagnostik af hepatitis C: markører, fortolkning af analysen

HBsAg og HCV blodprøve: hvad er det, indikationer, afkodning

Anti-HCV blodprøve: fortolkning af resultater, indikationer for forskning

HBs Ag: hvad er denne analyse, positiv, negativ, afkodning

Test for hepatitis B: normer, resultater og deres fortolkning

Differentiel diagnose af hepatitis C: PCR, ELISA og yderligere undersøgelser

Det forårsagende middel til HCV-infektion er blevet kendt relativt for nylig. Indtil begyndelsen af ​​1990'erne var nøjagtig påvisning af sygdommen et alvorligt problem. Dette førte til den brede spredning af virussen under blodtransfusionsprocedurer og organtransplantation, et langt infektionsforløb uden tilstrækkelig behandling. Men nu er diagnosen hepatitis C nøjagtig, testene hjælper med at forudsige effektiviteten af ​​behandlingen, og varigheden af ​​specifikke undersøgelser overstiger ikke 3-5 dage.

Så hvorfor sammenligner nogle eksperter spredningen af ​​HCV med en epidemi? Moderne russisk lovgivning indeholder bestemmelser om regelmæssig testning af hepatitis C ved ELISA-metode både hos mennesker i fare og hos arbejdstagere, der kan inficere andre. Ikke desto mindre gennemgår mange ikke regelmæssige lægeundersøgelser og består ikke engang kliniske standardprøver for ikke at nævne specifikke studier..

  • Hvad er det?
  • Fra historien om udseendet af hepatitis C
  • Hvordan spredes hepatitis C??
  • Hvordan kan du få hepatitis C?
  • Hvilken kategori af mennesker udsættes for denne sygdom?
  • Sådan identificeres komplikationer?
  • Hvilken kategori af mennesker udsættes for denne sygdom?

Men HCV ledsages ikke altid af kliniske manifestationer, desuden bemærkes karakteristiske symptomer på sygdommen kun hos en fjerdedel af patienterne. En virusinfektion fortsætter normalt langsomt, men replikationen af ​​patogenet af patologien sker konstant. Som et resultat forekommer irreversibel død af hepatocytter. I stedet for celler, der har mistet deres funktioner, vises bindevævsområder - en slags ar.

Således udvikler fibrose, som, hvis der ikke træffes terapeutiske foranstaltninger, udvikler sig til levercirrose - en alvorlig sygdom ledsaget af en forstyrrelse af arbejdet i alle indre organer. Når du diagnosticeres på dette tidspunkt, kan du slippe af med virussen. Ændringer i leverparenkymet forbliver dog irreversible. I nogle tilfælde har patienter brug for hurtig levertransplantation, og behandlingen begynder efter operationen..

Derfor, jo hurtigere en nøjagtig diagnose stilles, jo hurtigere begynder lægen behandlingen. Således stoppes replikationen af ​​virussen, selv før alvorlige komplikationer udvikler sig. Imidlertid er rutinemæssig klinisk forskning ikke nok til at opdage infektion. Det er nødvendigt at bestå mere specifikke tests, som adskiller sig både i udførelsesteknikken og i de særlige egenskaber ved afkodning af resultaterne.

Du kan selv foretage en række diagnostiske tests, men kun en læge skal fortolke de opnåede data (især hvis de er positive eller tvivlsomme)..

Sådan identificeres hepatitis C?

Det er muligt at mistanke om tilstedeværelsen af ​​infektion ved nogle kliniske tegn. Disse inkluderer:

  • konstant følelse af svaghed
  • astenisk syndrom
  • intolerance over for fysisk aktivitet (tidligere sædvanlig)
  • døsighed
  • følelsesmæssig irritabilitet
  • fordøjelsesforstyrrelser af forskellig intensitet (kan være fraværende, undertiden manifesteret som manglende appetit, kvalme).

Men sådanne symptomer kan ikke pålideligt identificere HCV, da disse tegn ikke er specifikke og indikerer mange andre patologier eller almindelig overanstrengelse.

Sådan bestemmes hepatitis C hos voksne og børn:

  • på en blodprøve for indholdet af visse immunglobuliner (ELISA);
  • baseret på resultaterne af en undersøgelse udført ved metoden til polymerasekædereaktion;
  • biokemisk analyse af indholdet af leverprøver, bilirubin.

For nylig er der kommet diagnostiske sæt på det farmaceutiske marked, der giver dig mulighed for at teste for hepatitis C derhjemme. Disse testsæt er mindre følsomme end laboratorietests. Men generelt er dette en hurtig og ret nøjagtig måde til selvdiagnose..

Fortolkning af resultater, især hvis det er tvivlsomt, skal foretages af en læge. En positiv test er en indikation for konsultation af en læge.

Derudover er det nødvendigt at kontrollere indikatorerne for en generel klinisk test af blod og urin. Inden behandlingen påbegyndes, vurderer lægen levertilstanden i henhold til data fra ikke-invasive undersøgelser (ultralyd, elastometri). Hvis der er mistanke om alvorlig vævsskade, udføres en organbiopsi.

Grundlæggende metoder til laboratoriediagnostik

I betragtning af det lange asymptomatiske forløb kan resultaterne af en rutinemæssig blod- og urintest være uden nogen afvigelser. Derfor anvendes serologiske (ELISA) og molekylære (PCR) metoder til laboratoriediagnostik til at detektere hepatitis C-virus. For at gøre dette skal du donere blod fra en vene i et privat laboratorium eller klinik på bopælsstedet. Betegnelsen for opnåelse af resultater er op til 5 dage.

Mere om diagnosen af ​​sygdommen

Hvornår kan HCV påvises i blodet?

De vigtigste metoder til diagnosticering af patologi kan opdeles i to grupper. Molekylær forskning har til formål at påvise viruspartikler. Ud over tilstedeværelsen af ​​RNA af det forårsagende middel til hepatitis C viser en sådan analyse dets kvantitative indhold og den nøjagtige genotype. Serologisk test (ELISA) "reagerer" på produktionen af ​​immunglobuliner syntetiseret, når virussen kommer ind i det humane blod.

RNA-niveauet, der er tilstrækkeligt til laboratoriebestemmelse, nås 10–16 dage efter infektion (hvis diagnostik udføres med moderne meget følsomme teknologier). Virus-RNA kan kvantificeres senere, 4-6 uger efter infektion. Samtidig tilrådes det at udføre genotypebestemmelse. Syntesen af ​​antistoffer begynder straks ved den første kontakt af virussen med humant blod. Men på en laboratoriemetode ved hjælp af ELISA-analyse kan de først påvises efter 3-4 uger.

Muligheden for at detektere virussen i de tidlige stadier afhænger af patientens individuelle karakteristika - tidspunktet for antistofproduktion og aktiviteten af ​​virusreplikationsprocesserne.

Hvilke tests der tages, hvis du har mistanke om hepatitis C:

  • blodbiokemi, leverfunktionstest (afvigelser fra normen kan kun indirekte indikere tilstedeværelsen af ​​hepatitis C);
  • ELISA;
  • PCR.

En kompetent komplet undersøgelse trin for trin hjælper med at eliminere usikre resultater, giver det mest nøjagtige billede af patientens helbred som helhed og giver lægen mulighed for at ordinere den korrekte behandling.

PCR-diagnostik

PCR-testen er den mest nøjagtige test til påvisning af hepatitis C i kroppen. Selve princippet om at oprette en polymerasekædereaktion er ret kompliceret. Til udførelse kræves en forarbejdet og passende fremstillet prøve af biologisk materiale. Der tilsættes et enzym til det, der provokerer delingen af ​​en given sektion af RNA (hvis nogen) i geometrisk progression. Derefter udføres bestemmelsen af ​​viruspartikler ved hjælp af forskellige fysiske og kemiske metoder..

De vigtigste forskelle mellem PCR-diagnostik af hepatitis C fra undersøgelsen ved hjælp af enzymimmunoanalyse er vist i tabellen:

Molekylær test udført ved PCR-metodeTilknyttet immunosorbent assay
Forskningsmål
RNA af virussen i blodetAntistoffer mod hepatitis C (klasse G og M)
Forskellige analyser og undersøgte kriterier
Kvalitativ analyse giver dig mulighed for at besvare hovedspørgsmålet, er en person sund eller sygAnti HCV Total bestemmer den totale titer for alle antistoffer mod hepatitis C patogenet i blodet, uanset klasse
Kvantitativ forskning estimerer viral belastningBestemmelse af immunglobuliner efter klasser: detekterede IgG-markører indikerer kronisk infektion, IgM - omtrent akut
Genotypebestemmelse bruges til at identificere en type patologiAntistoffer med kerneprotein og ikke-strukturelle HCV-proteiner er en detaljeret analyse, ordineres sjældent, bruges til differentiel diagnose af infektion med andre sygdomme, forudsigende karakteristika for forløbet og resultatet
Tidspunkt for diagnose
op til 3 dage3-5 dage
Tid for påvisning (fra tidspunktet for infektion)
10-14 dageEfter 3-4 uger
Sandsynligheden for at modtage falske resultater og fejlagtig dekryptering
Minimale fejl kan være forbundet med forkert forberedelse af prøven eller overtrædelse af reglerne for indstilling af reaktionenForkerte resultater (falskt negativt eller falskt positivt) kan skyldes visse sygdomme og tilstande (for eksempel graviditet, autoimmune lidelser, HIV, systemiske infektioner osv.)

Kvalitativ forskning

En kvalitativ analyse designet til at detektere patogent RNA er strengt specifik, derfor bruges den til differentiel diagnose af kronisk viral hepatitis C og til den primære bestemmelse af tilstedeværelsen af ​​sygdommen. Moderne sæt reagenser, der anvendes til forskning, er kendetegnet ved høj følsomhed. Pålidelig diagnose er mulig inden for 1,5-2 uger efter infektion.

Det er ikke svært at dechiffrere analysen. Hvis der findes viruspartikler, er personen syg, eller sygdommen er kommet sig. Et negativt resultat indikerer fraværet af patologi eller et diagnostisk vindue, når en person er inficeret, men patogenets RNA-niveau er for lavt til laboratorieopdagelse.

Ved hjælp af kvalitativ analyse ved PCR-metode er tidlig diagnose af virusinfektion mulig.

Kvantitativ analyse

Undersøgelsen udføres efter bekræftelse af diagnosen hepatitis C ved højkvalitets PCR. Analysen bestemmer indikatoren for virusbelastning. Denne parameter bestemmer aktiviteten af ​​den patologiske proces. Afhængigt af resultatet af den kvantitative analyse skelnes der mellem forskellige niveauer af viral belastning (præsenteret i tabellen).

Virusbelastning (målt i IE / ml)Afkodning
Under 3ˑ104Lav viræmi
3ˑ104–8ˑ105Medium viræmi
Over 8ˑ105Høj viræmi

Jo højere parameteren viral load (VL) er, jo mere aktiv replikering af virussen opstår, jo dårligere er prognosen, og jo større er sandsynligheden for irreversible ændringer i levervævets struktur. Som regel ledsages høj viræmi af temmelig karakteristiske kliniske manifestationer af infektion. Påvisning af lav VL, især på baggrund af sygdommens akutte fase, er en forudsigelse for spontan bedring. I dette tilfælde udsættes starten af ​​behandlingen i 7-14 dage, hvorefter undersøgelsen gentages.

Genotypebestemmelse

Denne analyse udføres kun, hvis virus-RNA detekteres i blodet, og dets kvantitative indhold er fastslået. Genotypebestemmelse er den eneste undersøgelse, der vil bestemme typen af ​​det forårsagende middel til hepatitis C. Dette er den eneste måde at ordinere et behandlingsforløb korrekt og fastslå varigheden af ​​deres anvendelse.

Express test derhjemme

I øjeblikket er diagnosen en virusinfektion mulig derhjemme, og personen har ikke brug for nogen specielle medicinske færdigheder. Hurtig test for hepatitis C "virker" på princippet om enzymimmunoanalyse, det vil sige, at sættet giver dig mulighed for at bestemme tilstedeværelsen af ​​antistoffer mod HCV i en prøve af biologisk materiale. De fleste testsystemer er designet til at teste blod. Men der er kits, der giver dig mulighed for at finde ud af, om der er immunglobuliner til hepatitis C i spyt.

Flere kliniske studier er blevet udført på pålideligheden af ​​hurtige tests. Det er blevet fastslået, at sådanne sæt ikke er den mest nøjagtige måde at diagnosticere en infektion på; meget afhænger af den korrekte samling af biologisk materiale, overholdelse af andre regler for udførelse af analysen. Imidlertid gør udførelsen af ​​en sådan test det muligt at bestemme infektionen uafhængigt uden at besøge en læge og et laboratorium..

Prisen på et testsystem, der giver dig mulighed for at kontrollere tilstedeværelsen af ​​en virus, varierer fra 800-2000 rubler afhængigt af producenten og metoden til at udføre analysen. Undersøgelsen udføres som følger. En prøve af biologisk materiale (spyt eller blod) påføres teststrimlen, og den tildelte tid ventes. Udseendet af en kontrolstrimmel indikerer et negativt resultat, to linjer indikerer en mulig infektion.

Forberedelse til testning

Når du forbereder dig til undersøgelsen, skal du følge følgende regler:

  • udelukke den toksiske virkning af alkohol på leveren (stop med at drikke alkohol 5-7 dage før testning);
  • følg en diæt med begrænsning af fede, stegte, røget mad (tabel nummer 5) en uge før undersøgelsen;
  • doner blod strengt på tom mave (madindtagelse er forbudt 12-14 timer før blodprøvetagning)
  • ryger ikke 8 timer før undersøgelsen.

Der er flere måder at diagnosticere. Du kan donere blod i et privat laboratorium, der ikke kræver henvisning fra en læge. De nødvendige tests udføres under en forsikringspolice, men inden det bliver du nødt til at få henvisninger fra en lokal læge eller specialist i infektionssygdomme.

Ændringer i blodtal

Ofte er patienter interesserede i, om en generel blodprøve vil vise hepatitis C, fordi der regelmæssigt gives generelle kliniske studier for virussygdomme og andre mere almindelige infektioner. Men ændringer i blodbilledet forekommer ikke altid. Derudover er sådanne lidelser uspecifikke og tillader ikke en nøjagtig diagnose af sygdommen..

I ca. 20-30% af tilfældene forekommer følgende ændringer:

  • fald i det samlede niveau af leukocytter på grund af lymfocytter;
  • fald i hæmoglobinindhold
  • en ændring i niveauet af blodplader på grund af lidelser i blodkoagulationssystemet;
  • øge parametrene for erytrocytsedimenteringshastigheden.

En anden måde at opdage viral leverskade er indikatorerne for en biokemisk blodprøve..

Mulig infektion er indikeret af en stigning i koncentrationen:

  • bilirubin;
  • ALT;
  • AST;
  • kreatinin;
  • albumin.

Forstyrrelser i leverens funktionelle aktivitet forsvinder ved indtagelse af antivirale lægemidler.

Hepatitis C diagnosticeres ikke baseret på leverfunktionstest og rutinemæssigt blodtal.

Sådan identificeres komplikationer

For at få et komplet billede af patientens tilstand kræves yderligere instrumentale undersøgelser. Dette skyldes patologiens lange asymptomatiske forløb. Ofte lærer patienten om tilstedeværelsen af ​​sygdommen på fibrose-stadiet og med en dårlig prognose på cirrose-stadiet eller ondartet malignitet af hepatocytter..

Terapiens taktik afhænger stort set af leverens tilstand. I dekompenserede former for cirrose suppleres indtagelsen af ​​målrettede antivirale lægemidler med ribavirin, eller behandlingsvarigheden øges til 24 uger.

Leverbiopsi

Proceduren udføres for at bestemme scenen og graden af ​​skrumpelever samt for at bekræfte den ondartede degeneration af celler (tumoren detekteres tidligere ved hjælp af ultralyd). Punkteringen udføres på et hospital under lokalbedøvelse.

Under ultralydskontrol laver specialisten en punktering og indsætter en speciel nål med et fangstsystem i leverparenkymet, som gør det muligt at tage en prøve af biologisk materiale. Et stykke væv placeres i et specielt medium, hvis nødvendigt tilsættes et farvestof og undersøges under et mikroskop.

En kontraindikation til proceduren er parasitisk leverskade og alvorlige lidelser i koagulationssystemet. Derudover afhænger muligheden for at udføre manipulationen direkte af patientens samtykke. For at træffe en informeret beslutning skal lægen forklare detaljeret, hvorfor biopsiresultaterne er nødvendige, hvilke risici der er under proceduren..

Ultralydundersøgelse kombinerer højt informationsindhold, smertefrihed og sikkerhed. Inden for 15-20 minutter kan lægen få detaljerede data om leverens størrelse og struktur og andre maveorganer.

Som regel viser en ultralydsscanning på baggrund af hepatitis C:

  • krænkelser af blodtilførslen til organet
  • ændringer forbundet med udstrømning og udskillelse af galde
  • tilstedeværelsen af ​​sæler, foci af betændelse, nekrose, i alvorlige tilfælde er det muligt at opdage neoplasmer;
  • udvidelse af leveren.

Baseret på resultaterne af en ultralydsscanning vil lægen forstå omfanget af leverskader, men nøjagtig diagnose af hepatitis C er kun mulig baseret på resultaterne af en blodprøve.

Elastometri

Selve teknikken til at udføre undersøgelsen ligner ultralydsdiagnostik. Elastometri er en ikke-invasiv smertefri undersøgelse designet til at vurdere tætheden af ​​leverparenkymet. Således kan lægen bestemme stadium og sværhedsgrad af fibrose, hvor organets normale væv erstattes af bindevæv. Uden passende behandling og målrettet antiviral behandling udvikler skrumpelever.

CT, MR

Sådanne teknikker er informative i diagnosen cirrose og tilstedeværelsen af ​​ondartede svulster. Tomogrammet har en række kontraindikationer. Men en sådan undersøgelse er meget mere informativ end ultralyd og elastometri, det giver dig mulighed for fuldt ud at vurdere leverens tilstand..

Selvdiagnose

Selvdiagnose af virussen uden ordentlig forskning og deres kompetente afkodning er umulig. En person kan mistanke om en infektion på grund af en række symptomer, for eksempel øget træthed, vedvarende svaghed kombineret med fordøjelsesforstyrrelser. Risikogruppen inkluderer mennesker, der ofte gennemgår invasive medicinske eller æstetiske procedurer og forsømmer barrierebeskyttelsesmetoder under utilsigtet samleje.

Den nemmeste måde at selvdiagnosticere er at gennemføre en ekspres test eller tage tests i et betalt laboratorium. Imidlertid er det bedre at gennemgå en omfattende undersøgelse under tilsyn af en læge i nærværelse af en typisk viral leverskade..

Undersøgelse af gravide kvinder

Undersøgelse for hepatitis C under graviditet er obligatorisk og udføres to gange: ved den første konsultation med en gynækolog og registrering og derefter midt i sidste trimester. Lægen ordinerer analyser udført efter ELISA-metoden. Men det største problem er at få falske positive. Efter undfangelsen begynder kvindens krop at producere proteiner, der strukturelt ligner antistoffer mod hepatitis C.

Derfor er en positiv ELISA under graviditet ikke altid et tegn på infektion og kræver bekræftelse af PCR. I løbet af fødselsperioden er det også muligt at undersøge maveorganerne ved hjælp af ultralyd, undertiden udføres elastometri. Men når diagnosen er bekræftet, kan behandling skade fosteret. Derfor ordineres medicin, der understøtter kvindens helbred, og hovedterapien begynder efter fødslen..

Konklusion

Behandling af hepatitis C er ret mulig i både akutte og kroniske faser. Men en af ​​betingelserne for vellykket terapi er rettidig diagnose, når det stadig er muligt at gendanne leverens funktionelle aktivitet. Derfor anbefaler eksperter at tage passende tests alene eller i en henvisning fra en læge, og hvis resultatet er positivt, skal du straks søge lægehjælp.

Diagnose af hepatitis ved ifa-metoden

Specifik laboratoriediagnostik af viral hepatitis er baseret på brugen af ​​immunokemiske og molekylære biologiske forskningsmetoder. De vigtigste immunkemiske metoder er radioisotop eller radioimmunoanalyse (RIA) og enzymimmunanalyse (ELISA). Grundlaget for immunokemiske diagnostiske metoder er den specifikke interaktion mellem antigen-antistof og den efterfølgende identifikation af komplekset ved hjælp af specielle mærker. Den mest almindelige er enzymimmunanalyse.

De første rapporter om brugen af ​​enzymbundet immunosorbentassay som metode til bestemmelse af stoffer blev offentliggjort i 1971 samtidigt af to forskningsgrupper - B. Van Weemen, A. Schuurs og E. Engvall, P. Perlmann. Den enzymbundne immunosorbentanalyse er baseret på følgende princip: på den faste fase, der hovedsagelig bruges som overfladen af ​​brøndene i en polystyrenplade, er antigenet til det infektiøse middel eller antistoffer (ofte en blanding af antistoffer) til de antigener, der skal detekteres, fikseres. Dette antigen eller antistoffer, der er fikseret på den faste fase, kaldes immunsorbent.

Som et resultat af inkubationen af ​​immunosorbenten og testserumet i nærværelse af det bestemte middel, er de bundet til et antigen-antistof-kompleks. Efter vaskeproceduren, som fjerner ubundne antigener og antistoffer, udføres inkubation med konjugatet. Som et konjugat til påvisning af HBsAg anvendes anti-HB'er til påvisning af antistoffer mod hepatitis C-virus - antistoffer mod humane immunglobuliner (anti-art-konjugat) mærket med peberrodsperoxidase. Som et resultat af denne inkubation tilsættes et yderligere indført konjugat til de allerede eksisterende antigen-antistofkomplekser. Efter fjernelse af det ubundne konjugat (vask) indføres substratet i brøndene. Ved anvendelse af et peroxidasekonjugat anvendes hydrogenperoxid som substrat i kombination med en indikator, der oftest bruges som orthophenylendiamin (OPD) eller tetramethylbenzidin (TMB). Resultatet vurderes fotometrisk.

Kvaliteten og pålideligheden af ​​ELISA-metodens analytiske egenskaber er kendetegnet ved en række kriterier, der inkluderer følsomhed, specificitet, nøjagtighed og reproducerbarhed..

Følsomhed er den mindste mængde af et stof, der kan detekteres ved hjælp af et enzymimmunassay. I dette tilfælde er den nedre følsomhedsgrænse for denne metode koncentrationen af ​​teststoffet i prøven, hvilket svarer til det mindste positive resultat af bestemmelsen, hvilket statistisk signifikant adskiller sig fra indikatorerne for åbenlyst negative prøver. IPTS-følsomheden afhænger af en række omstændigheder, der er relateret til både testsystemets design (immunitetens affinitet, kvaliteten af ​​ekstraktions- og buffersystemer) og registreringsmetodens opløsning og nøjagtighed..

Specificitet - evnen til at identificere nøjagtigt de komponenter til bestemmelse, som dette enzymbundne immunosorbentassay er beregnet til. ELISA's specificitet bestemmes i vid udstrækning af krydsreaktionen af ​​antistoffer eller antigener (dvs. sammensætningen anvendt som et immunosorbent) med nært beslægtede forbindelser samt sammensætningen af ​​inkubationsmediet (matrixeffekt).

Nøjagtighed - korrespondancen mellem gennemsnitsværdien af ​​resultaterne af gentagne bestemninger af den samme kontrolprøve og den sande værdi af den målte parameter. Nøjagtigheden af ​​ELISA-bestemmelsen afhænger af kvaliteten af ​​selve testsystemet og kontrolprøven. For gode enzymbundne immunosorbentassays er korrekthedsværdierne i området 90-110%. Et træk ved biomedicinsk forskning i ELISA er umuligheden af ​​at fastlægge den nøjagtige værdi, og derfor tages gennemsnittet fra flere ekspertlaboratorier som den sande værdi. Det statistiske kriterium for korrekthed er det aritmetiske gennemsnit og graden af ​​dets afvigelse fra den sande værdi udtrykt i procent.

Reproducerbarhed er et testsystems evne til at vise de samme værdier ved gentagne tests af den samme prøve. Reproducerbarhed afhænger både af tilfældige fejl (fejl) under reaktionsindstillingsproceduren og af kvaliteten af ​​testsystemer og nøjagtigheden af ​​metoden til registrering af resultater. Det antages, at reproducerbarheden af ​​de samme kontrolprøver fra det samme firma i forskellige laboratorier ikke bør overstige værdien af ​​variationskoefficienten på 15%.

Der er flere specifikke ELISA-ordninger til bestemmelse af markører for viral hepatitis: a) direkte enzymimmunoanalyse; b) indirekte enzymimmunoanalyse; c) konkurrencehæmning c) "fælde" eller "fange" metode.

Af de molekylærbiologiske metoder til diagnosticering af viral hepatitis anvendes polymerasekædereaktion og hybridisering oftere. Disse metoder, især PCR, gør det muligt at detektere meget små mængder specifikt viralt DNA eller RNA og således at bedømme om replikation og i nogle tilfælde om replikationsaktiviteten.